Modele cre lox

Les scientifiques ont développé des moyens de contrôler étroitement l`expression cre et d`optimiser l`expression cre une fois qu`elle est induite. Addgene a une grande variété de plasmides de cre recombinase. Les caractéristiques spéciales comprennent: le portail cre contient des données recueillies sur tous les transgènes contenant de la recombinase et les Knock-ins développés chez la souris pour fournir une ressource exhaustive… Recombinaison d`ADN spécifique au site dans les cellules de mammifères par la cre recombinase du bactériophage P1. Sauer B, Henderson N. Proc Natl Acad Sci U S A. 1988 Jul; 85 (14): 5166-70. Pubmed. Lorsqu`une telle souche de reporter est accouplée à une souche exprimant la CRE, elle produit une progéniture dans laquelle le marqueur visible n`est exprimé que dans les tissus ayant une activité cre (figure 8).

Encore une fois, une seule génération de reproducteurs est nécessaire. Le système Cre/lox peut également être utilisé pour produire des souches dans lesquelles un transgène est soit inductible, soit exprimé uniquement dans certains tissus. Par exemple, l`accouplement de la souche transgénique de la figure 1 à une souche qui exprime la recombinase cre dans le tissu mammaire produit une progéniture transgénique double qui exprime l`oncogène de Kras seulement dans les glandes mammaires (figure 5). Remarquez qu`une seule génération de reproducteurs est nécessaire (Hourra!). Ces constructions permettent une expression génique régulée par la CRE. En fonction de la construction, cre peut activer ou réprimer l`expression génique. Les types de construction communs incluent: pendant la recombinaison génétique, une jonction de Holliday est formée entre les deux brins de l`ADN et une rupture de double-brin dans une molécule d`ADN laisse une extrémité 3 `OH exposée. Cette réaction est facilitée par l`activité de l`endonucléase d`une enzyme. 5 `les extrémités de phosphate sont généralement les substrats pour cette réaction, ainsi étendu 3 `régions restent.

Ce groupe de 3 `OH est très instable, et le brin sur lequel il est présent doit trouver son complément. Depuis la recombinaison homologue se produit après la réplication de l`ADN, deux brins d`ADN sont disponibles, et donc, le groupe 3 `OH doit coupler avec son complément, et il le fait, avec un brin intact sur l`autre duplex. Maintenant, un point de croisement a eu lieu, ce qui est appelé un intermédiaire Holliday. Une autre variante qui aide à contrôler l`expression du gène en termes de son timing est le système inductible par le tamoxifène. 25 Ceci est fait par l`addition d`un domaine de liaison de ligand (récepteur d`oestrogène) sur la recombinase cre qui est spécifiquement activée par le tamoxifen. Une fois que les deux séquences de la cre muté et les gènes loxP sont localisés dans une souris, l`absence de tamoxifène entraînera la navette de la recombinase muté dans le cytoplasme. La protéine restera dans cet endroit dans son état inactivé jusqu`à ce que le tamoxifène soit administré. Une fois le tamoxifène introduit, la recombinase muté est réacheminé dans le noyau et est capable de cliver les sites de LOX, entraînant une perte d`expression. [26] les souches de rapporteurs de cre peuvent également être utilisées pour générer une source de tissus/organes étiquetés, ce qui permet aux chercheurs de suivre les cellules dans les expériences de transplantation ou de transfert adoptifs. Utomo AR, Nikitin AY, Lee WH. 1999.

Contrôle temporel, spatial et spécifique du type de cellule de la recombinaison d`ADN induite par la cre chez des souris transgéniques. NAT Biotechnol 17:1091-6. Peu après, des chercheurs du laboratoire du Prof. Klaus Rajewsky ont rapporté la production de cellules souches embryonnaires pluripotentes portant un gène ciblé de l`ADN polymérase à flancs loxP (floxé). en combinant ces progrès en collaboration, les laboratoires des Drs Marth et Rajewsky ont rapporté en 1994 que la recombinaison CRE-LOX pouvait être utilisée pour le ciblage génique conditionnel dans le développement de lymphocytes T chez les souris [5]. Ils ont observé que ~ 50% du gène bêta de l`ADN polymérase a été supprimé dans les lymphocytes T à partir de l`ADN buvard.

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